曾在第五屆PDA全球年會(huì)上，最終用戶、監(jiān)管機(jī)構(gòu)、制藥領(lǐng)域?qū)＜引R聚一堂。Ed Tidswell博士曾對(duì)無法培養(yǎng)出的菌種（Viable but culturalbe，VBNC）的影響進(jìn)行了討論。

他提出，在將近150萬種不同的微生物種群中，只有不到0.1%的微生物可以通過培養(yǎng)的方式獲得。他指出培養(yǎng)基罐裝、環(huán)境監(jiān)控和成品的無菌檢測(cè)并不能檢測(cè)出所有的微生物。因此，他建議，應(yīng)該采用快速的，不依賴于培養(yǎng)方式的微生物檢測(cè)方法

新技術(shù)的方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施

在會(huì)議上，來自各大企業(yè)的技術(shù)專家分別闡述了自己的觀點(diǎn)。

來自諾華制藥的Jennifer Gray展示了他們使用MilliporeMilliflex Rapid替代傳統(tǒng)方式進(jìn)行無菌檢測(cè)，其原理是ATP生物熒光法。他們運(yùn)用這個(gè)方式的動(dòng)機(jī)是為了盡早地發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品的染菌風(fēng)險(xiǎn)、降低產(chǎn)品放行周期并且也意在提高公司在快速微生物檢測(cè)方面的專業(yè)性。諾華花了5天時(shí)間驗(yàn)證了22個(gè)菌種，7個(gè)來自ATCC，15個(gè)來自環(huán)境取樣。FDA批準(zhǔn)了對(duì)比試驗(yàn)的方案，EMA在2010年2月份，MHRA在2010年5月份也都批準(zhǔn)了他們的方案。

來自輝瑞制藥的Amelia Tait Kamradt, 討論了他們使用PALL公司New GeneDisc System的情況。他們?cè)谝恍┓矫孀隽撕芏嗟难芯�，比如專屬性、檢查限、耐用性等。

來自默克的Geert Verdonk博士分享了他使用Charles River實(shí)驗(yàn)室公司的endosafe進(jìn)行的驗(yàn)證工作。他在默克快速微生物檢測(cè)項(xiàng)目中使用該公司的便攜式內(nèi)毒素產(chǎn)品，并進(jìn)行了很多驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

來自Accugenix公司的Sara Polson提出他們使用的飛行時(shí)間---次級(jí)離子質(zhì)譜分析法（TOF MS）微生物識(shí)別系統(tǒng)，可以電離微生物細(xì)胞，從而可以把微粒按照尺寸和電荷分開。這種特異性可以用于對(duì)微生物種類的識(shí)別。

其實(shí)類似的應(yīng)用很多，而在國(guó)際知名企業(yè)中尤為顯著，這主要基于這些公司對(duì)技術(shù)變革的渴望，尤其是對(duì)新技術(shù)將給他們的生產(chǎn)和產(chǎn)品帶來的收益。制藥行業(yè)是一個(gè)即保守又激進(jìn)的行業(yè)。它的保守在于，任何改變都是會(huì)付出代價(jià)的，尤其是跟人類息息相關(guān)的健康掛鉤，任何沒有原則或者不慎重的改變往往會(huì)導(dǎo)致災(zāi)難。同時(shí)他又是激進(jìn)的，因?yàn)樗�出來科技發(fā)展的前沿，沐浴在科技日新月異進(jìn)步，各種技術(shù)壁壘不斷被攻克的氛圍之中，創(chuàng)新和開發(fā)是這個(gè)行業(yè)的靈魂之一。

各國(guó)藥典委員會(huì)對(duì)RMMs提出的愿景

美國(guó)藥典委員會(huì)專家James Aker博士指出，所有美國(guó)藥典上所羅列的參考方式都適用于幾乎所有類型的產(chǎn)品。而且新的方法想要收錄到藥典中的話，必須不能具有專利保護(hù)且來源單一，還要清晰的區(qū)分是用于放行標(biāo)準(zhǔn)還是過程檢測(cè)。因此，如果有企業(yè)想要提交一種新型的快速檢測(cè)方式，并且意在將其收錄在藥典中的話，必須要考慮到上述的這些面。USP1223撰寫的目的就是為了給企業(yè)提供關(guān)于替代檢測(cè)方法的驗(yàn)證指南，而RMMs也應(yīng)該算作是微生物檢測(cè)的替代方法。事實(shí)上，USP62早已明確了RMMs和替代方法可以使用，只要經(jīng)過合理的驗(yàn)證。

歐盟藥典委員會(huì)的Han van Doorne博士指出，歐盟藥典的相應(yīng)章節(jié)也規(guī)定，只要證明替代方式和現(xiàn)有方式的等效性，那么前者是可以使用的。章節(jié)2.6.27寫道，自動(dòng)化系統(tǒng)通常被應(yīng)用于細(xì)胞類制品，例如對(duì)于無菌水平的日常監(jiān)控。章節(jié)2.6.7提到，使用核酸技術(shù)來檢測(cè)支原體。這些都是已經(jīng)被收入到藥典中的新的檢測(cè)手段。章節(jié)5.1.6則推出了對(duì)于可替代微生物檢測(cè)方法的驗(yàn)證。之后Han van Doorne博士提出今后會(huì)對(duì)章節(jié)5.1.6進(jìn)行修訂，他們打算增加更多關(guān)于過程分析技術(shù)（PAT）的內(nèi)容，用以明確的區(qū)分檢測(cè)、分離、辨別之間的不同。不過，這將不會(huì)出現(xiàn)在之后修正版本中，而是以白皮書的形式出現(xiàn)在歐盟藥典里，這個(gè)章節(jié)將會(huì)加入基于DNA技術(shù)的方法。最后他分析了來自于工業(yè)用戶的調(diào)查結(jié)果，這個(gè)調(diào)查來自于制藥用戶對(duì)之后的修訂章節(jié)的期望，這些期望包括了，什么樣的應(yīng)用已經(jīng)批準(zhǔn)可以使用RMMs，是否只能將RMMs用于實(shí)驗(yàn)而非放行，能否披露更多驗(yàn)證方面等諸多內(nèi)容。

日本藥典委員會(huì)的Tsuguo Sasaki博士表示，目前已經(jīng)有2個(gè)新的關(guān)于RMMs章節(jié)收錄到日本藥典中。其中包括章節(jié)22（基于分子生物學(xué)的方法來快速鑒別微生物），章節(jié)33（基于熒光染色方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行快速計(jì)數(shù)）。之后他又列舉了一些例子，說的是RMMs驗(yàn)證與藥典要求不在同一層面。例如，有一家滴眼液企業(yè)提交了一份快速檢測(cè)驗(yàn)證方案，使用ATP生物發(fā)光技術(shù)縮短無菌檢測(cè)時(shí)間，從2周縮短到1周，他們是用大豆酪蛋白培養(yǎng)基來代替之前的培養(yǎng)基，之前的培養(yǎng)基可以修復(fù)更多受損細(xì)胞。基于這個(gè)原因，這個(gè)申請(qǐng)沒有被批準(zhǔn)，Sasaki博士之后又展示了相關(guān)數(shù)據(jù)，一些菌落可以在R2A培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而TSA培養(yǎng)基則不行。因此，這家公司應(yīng)該重新去研究并且選擇更合適的培養(yǎng)基。

各國(guó)監(jiān)管部門提供對(duì)驗(yàn)證和應(yīng)用的指導(dǎo)和期望

澳大利亞藥品管理局的Vivian Christ提出，他們先后修訂了關(guān)于RMMs的相關(guān)條款，澳洲相關(guān)法規(guī)與歐盟和英國(guó)藥典上的相關(guān)規(guī)定大致相同，他們同時(shí)還參照了USP1223，Ph  Eur 5.1.6和PDA 33號(hào)技術(shù)報(bào)告以及ISO17025（對(duì)于非標(biāo)方法的驗(yàn)證）。從立法的角度來看，他們還轉(zhuǎn)向了GMP法規(guī)，也就是說，接受其他的方法的一個(gè)條件是要符合GMP的規(guī)定，例如附錄11（計(jì)算機(jī)驗(yàn)證）和附錄15（IQ、OQ、PQ）。然而不同于其他監(jiān)管機(jī)構(gòu)，澳洲管理局只是默認(rèn)了新的技術(shù)，而沒有公開出臺(tái)相應(yīng)的聲明和政策。

FDA的David Hussong博士說RMMs技術(shù)正是因?yàn)轫槕?yīng)了質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（QbD）的理念而顯得非常重要。他們鼓勵(lì)使用新的技術(shù)并且會(huì)推進(jìn)相關(guān)的立法進(jìn)程。對(duì)于QbD，對(duì)于生產(chǎn)過程中的分析是需要的，應(yīng)該持續(xù)進(jìn)行改進(jìn)，從而檢驗(yàn)設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)是否合理并且對(duì)比工藝過程中的改進(jìn)進(jìn)行分析。Rajesh Gupta博士討論了RMMs被用于作為替代的微生物檢測(cè)方式，從企業(yè)的角度來看，這可以針對(duì)過程中出現(xiàn)的問題提供更快的解決方案，一些生物制品的有效期很短（有的甚至只有14天，這幾乎是整個(gè)無菌檢測(cè)的時(shí)間）而且產(chǎn)量也很少，一般用于緊急使用，對(duì)于這類產(chǎn)品，其意義就尤為重要。所以考慮RMMs的時(shí)候也要考慮不用產(chǎn)品的不同情況。

最后，Tsuguo Sasaki博士提供了一些在日本RMMs使用的看法。日本監(jiān)管部門將和企業(yè)合作去發(fā)展RMMs在日本的政策。在大多數(shù)情況下，受損微生物是無法檢測(cè)的，如純化水系統(tǒng)。因此，快速連續(xù)監(jiān)測(cè)技術(shù)在制藥用水環(huán)節(jié)是非常需要的，除去技術(shù)之外，日本將會(huì)采用與美國(guó)相類似的RMM驗(yàn)證提交模式。

總結(jié)

正如大家所看到的那樣，對(duì)于RMMs的關(guān)注，從最終用戶到監(jiān)管機(jī)構(gòu)都已經(jīng)到達(dá)了非常高的水平，實(shí)際的發(fā)展勢(shì)頭也很猛。我們無需始終沉浸在19世紀(jì)技術(shù)的影響中�，F(xiàn)在是提出變革和創(chuàng)新的時(shí)候，所以大家應(yīng)該致力于對(duì)RMMs和新方法的探索和研究，以讓我們的檢測(cè)手段與目前飛速發(fā)展的工業(yè)進(jìn)程相一致。