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【新舊對比】GB 4789.40—2023《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌檢驗》變化對比

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-03-27
核心提示: 3月12日,根據(jù)《中華人民共和國食品安全法》規(guī)定,經(jīng)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)審評委員會審查通過,現(xiàn)發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)̳
 3月12日,根據(jù)《中華人民共和國食品安全法》規(guī)定,經(jīng)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)審評委員會審查通過,現(xiàn)發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760-2024)等47項食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)和6項修改單。

 

 

 

主要包括:微生物檢驗方法16項:


GB 4789.40-2024《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾檢驗》為上述標(biāo)準(zhǔn)之一。標(biāo)準(zhǔn)于2024年2月8日發(fā)布,將于2024年8月8日正式實施。

 



圖片
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本文通過對比克羅諾桿菌檢驗2024版與2016版標(biāo)準(zhǔn),使讀者更好地了解2024版修訂的變更,以便更好地掌握克羅諾檢驗的發(fā)展方向。

 

一、簡要說明

 

 

本標(biāo)準(zhǔn)與GB4789.40-2016相比主要變化如下

--修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱,刪除了阪崎腸桿菌,修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌檢驗”。

--標(biāo)準(zhǔn)適用范圍增加了嬰幼兒輔助食品;

--增加了PCR鑒定方法作為選做內(nèi)容;

--刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產(chǎn)黃色素和苦杏仁苷項目;

--修改了培養(yǎng)基和試劑pH調(diào)節(jié)方法;

--修改了預(yù)熱、選擇性增菌溫度以及TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間;

--修改了生化反應(yīng)的培養(yǎng)溫度及氨基酸培養(yǎng)基的制備。

 

二、變化詳情

 

 

1.范圍

 

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中克羅諾桿菌(Cronobacterspp)的檢驗方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、嬰幼兒輔助食品、乳及乳制品及其原料中克羅諾桿菌的檢驗。

 


無變化

增加嬰幼兒輔助食品

 

2.設(shè)備和材料

 

2016版

2024版

 


無變化

1.刪除25度恒溫培養(yǎng)箱;恒溫水浴溫度范圍調(diào)整,由原來的44℃±0.5℃調(diào)整為41.5℃±1℃;

2.增加0.01感量的天平;無菌錐形瓶修改為無菌容器;

3.增加PCR檢測方法的所用到的PCR儀、離心機、電泳儀、反應(yīng)管、離心管、接種環(huán)等設(shè)備和材料。

 

3.培養(yǎng)基和試劑

 


2024版

2016版

 


變化

1.阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基變更為“克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基”與標(biāo)準(zhǔn)名稱對應(yīng);

2.增加PCR檢測方法的培養(yǎng)基和試劑

 

4.檢驗流程

 

2016版

2024版


變化

1.ST-Vm增菌液培養(yǎng)溫度變更為“41.5℃±1℃”;

2.修改了預(yù)熱、選擇性增菌溫度以及TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間

3.增加PCR鑒定(選做),可節(jié)省檢測時間

 

5.
操作步驟


5.1 前增菌和選擇性增菌

取檢樣 100g(mL)置于無菌容器中,加入900mL已預(yù)熱至 41℃±1℃的 BPW,用手緩緩地?fù)u動至檢樣充分溶解后,36℃±1℃培養(yǎng)18h±2h。輕輕搖動混勻培養(yǎng)過的前增菌液,移取1mL轉(zhuǎn)入10mLmLST-Vm肉湯中,41.5℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h。

 


變化

1.無菌錐形瓶改為“無菌容器”;

2.為避免溫度較高損傷細(xì)菌,前增菌BPW的預(yù)熱溫度由44℃修改為41 ℃。

3.44℃的選擇性增菌溫度可能抑制部分損傷的克羅諾桿菌生長,容易導(dǎo)致污染樣品被漏檢。ISO22964-2017標(biāo)準(zhǔn)已對選擇性增菌溫度由 44 ℃±0.5 ℃修改為41.5 ℃±1 ℃。且在制定標(biāo)準(zhǔn)過程中的驗證試驗結(jié)果也顯示,mLST-Vm肉湯經(jīng)41.5 ℃培養(yǎng)后檢測結(jié)果優(yōu)于44 ℃。因此,GB4789.40新版標(biāo)準(zhǔn)中選擇性增菌溫度修改為41.5 ℃±1 ℃。

5.2 分離

5.2.1 輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養(yǎng)物,使用10μL接種環(huán)各取1環(huán)增菌培養(yǎng)物,分別劃線接種于2個克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基平板,36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h,或按培養(yǎng)基要求條件培養(yǎng)。

5.2.2 可疑菌落按顯色培養(yǎng)基要求進(jìn)行判定,每個平板挑取至少 5個可疑菌落(不足5個時挑取全部可疑菌落) ,分別劃線接種于TSA平板,36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h。


變化

1.分離用的接種環(huán)指出其為10μL的,更明確;

2.顯色培養(yǎng)基的名稱前后對應(yīng)起來,刪除了“顯色培養(yǎng)基須符合GB4789.28的要求”,個人覺得這是個漏點。

3.修改了TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間,由原來的25℃±1℃,培養(yǎng)48h±4h修改為“36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h”。

3.增加PCR鑒定方法:隨著微生物檢驗對快速方法的檢測需求, GB標(biāo)準(zhǔn)中引入PCR法,即可節(jié)省檢測時間,減少工作量,又可以提高結(jié)果的準(zhǔn)確性,實現(xiàn)對可疑菌落高通量的篩選。

5.4 確證試驗

選做5.3時,自PCR結(jié)果陽性的TSA平板上挑取菌落進(jìn)行生化鑒定, PCR結(jié)果陰性的TSA平板不再進(jìn)行生化鑒定。

未選做 5.3時 ,直接將 5.2.2的可疑菌落接種TSA平板后進(jìn)行生化鑒定。

可以首先鑒定克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基平板上最具特征性的菌落接種的TSA平板上的菌落。如果是陽性,則不需要測試其他TSA平板上的菌落。如果是陰性,則選取其他TSA平板上的菌落進(jìn)行鑒定,直到全部為陰性或發(fā)現(xiàn)陽性菌落為止。為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,對TSA平板上的菌落進(jìn)行鑒定時,應(yīng)使用新鮮的傳代菌落?肆_諾桿菌的主要生化特征見表3。 

上述鑒定也可選擇商生化特征見表3。上述鑒定也可選擇商品化生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行 。

 


變化

1.步驟名稱由鑒定修改為“確證試驗”;

2.刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產(chǎn)黃色素項目,因為在文獻(xiàn)報道和實際檢測中發(fā)現(xiàn)部分克羅諾桿菌不產(chǎn)黃色素,因此在新版標(biāo)準(zhǔn)中刪除了該步驟及生化鑒定中產(chǎn)黃色素項目的操作;

3.刪除苦杏仁苷生化反應(yīng);

4.強調(diào)做生化實驗的菌落一定要新鮮培養(yǎng)物,如果為陰性,需要繼續(xù)則選取其他TSA平板上的菌落進(jìn)行鑒定,直到全部為陰性或發(fā)現(xiàn)陽性菌落為止。

 

6 結(jié)果與報告

根據(jù)菌落特征、確證試驗(生化鑒定)和/或PCR鑒定結(jié)果,報告 100g(mL)樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌。

 


變化

1.修改了文字描述;

 

第二法 克羅諾桿菌定量檢驗
 

 

7 操作步驟

7.1 樣品的稀釋

取檢樣100g(mL)、10g(mL)、1g(mL)各3份,分別置無菌容器中,分別加入900mL、90mL、9mL已預(yù)熱至41℃±1℃的BPW,用手緩緩地?fù)u動至檢樣充分溶解,制成1:10樣品勻液,36 ℃±1℃培養(yǎng)18h±2h。輕輕搖動混勻培養(yǎng)過的前增菌液,分別移入1mL轉(zhuǎn)入10mLmLST-Vm肉湯,41.5℃±1℃培養(yǎng)24h±2h。

 


變化

1.修改了檢測方法的名稱;

2.同第一法一樣修改前增菌、增菌的培養(yǎng)溫度;

3.修改可了樣品處理的描述分固體和半固體、液體放在一起更簡潔。

7.2 分離、鑒定

同5.2、5.3和5.4。

8 結(jié)果與報告

綜合菌落特征、確證試驗(生化鑒定)或 PCR鑒定結(jié)果,根據(jù)檢出克羅諾桿菌的陽性管數(shù),查MPN檢索表,報告100g(mL)樣品中克羅諾桿菌的MPN值(見附錄C中表 C.1) 。



附錄變化

1.修改了培養(yǎng)基和試劑pH值調(diào)節(jié)方法,要求pH值滅菌后測定;

2.修改了相應(yīng)的培養(yǎng)基名稱及增加PCR檢測用的試劑配制方法。

3.修改了氨基酸培養(yǎng)基的制備。

編輯:songjiajie2010

 
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