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大腸菌群檢驗(yàn)方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2023-08-30
核心提示: 由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,即:需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性
 由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,即:需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進(jìn)行。

 

 

目前國內(nèi)采用的食品大腸菌群檢測方法主要有國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的進(jìn)出口行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測程序上略有不同。但兩種方法都是采用推測、驗(yàn)證兩大步驟。

推測試驗(yàn):樣品稀釋后,選擇三個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。

 

證實(shí)試驗(yàn):將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中,36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表,報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。

 

為方便大家使用和觀看,為大家總結(jié)MPN法檢驗(yàn)大腸菌群的流程如下:

  

乳糖發(fā)酵試驗(yàn):樣品稀釋后,選擇三個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種三管LST發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。

證實(shí)試驗(yàn):挑取LST產(chǎn)氣的發(fā)酵管,接種BGLB發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察產(chǎn)氣情況。

報(bào)告:根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN表,報(bào)告每ml(g)大腸菌群的MPN值。

 

具體操作參見GB4789.3、SN/T0169-2010進(jìn)出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢測方法》

 

貼心提醒,MPN采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法,通過稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù),經(jīng)一系列復(fù)雜的運(yùn)算,估算出具有共同特性的一類微生物在食品中存在的概率。

 

1.MPN檢索表:

MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡稱。這種方法,對(duì)樣品進(jìn)行連續(xù)系列進(jìn)行稀釋,加入培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率,用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。

 

MPN檢索表只給了三個(gè)稀釋度,如改用不同的稀釋度,則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。注意國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所附MPN表所用稀釋度是不同的,而且結(jié)果報(bào)告單位也不相同。

 

2.抑菌劑:

大腸菌群檢驗(yàn)中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、洗衣粉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑的主要作用是抑制其它雜菌,特別是革蘭氏陽性菌的生長。

 

標(biāo)準(zhǔn)中LST肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑,BGLB肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。

 

抑菌劑雖可抑制樣品中的一些雜菌,而有利于大腸菌群細(xì)菌的生長和挑選,但對(duì)大腸菌群中的某些菌株有時(shí)也產(chǎn)生一些抑制作用。有些抑菌劑用量甚微,稱量時(shí)稍有誤差,即可對(duì)抑菌作用產(chǎn)生影響,因此抑菌劑的添加應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。

 

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性,大腸菌群檢驗(yàn)過程中又有哪些注意事項(xiàng)呢?

 

1.檢樣時(shí)注意無菌操作;

 

2.稀釋時(shí)采用的稀釋液可以用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水,接種時(shí)可采用九管法,設(shè)置三個(gè)梯度,分別為0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL,每一個(gè)稀釋度的試管應(yīng)充分混勻;

 

3.每次實(shí)驗(yàn)需要有陰性對(duì)照;

 

4.使用小倒管培養(yǎng)基配制時(shí),為排凈氣泡,滅菌時(shí)不要把試管的蓋子蓋的太緊,滅菌后注意觀察一下倒管中的氣體是否排完全;

 

5.高壓滅菌后,等高壓滅菌鍋的壓力表達(dá)到0,取出培養(yǎng)基放到冰箱冷卻,效果會(huì)比較好;

 

6.在實(shí)際工作中,大腸菌群的產(chǎn)氣量不同,有時(shí)倒管中充滿氣體,有時(shí)倒管中只有非常少的氣體(類似小米粒的氣泡),這時(shí)可以輕輕搖晃試管,如有氣泡沿管壁快速上浮,應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生。

 

為了幫助大家更直觀的判斷,我們來看下這張圖,下圖為陰性結(jié)果和陽性結(jié)果的區(qū)別,有氣體且液體略為渾濁的即為陽性結(jié)果,可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)啦~

 

編輯:songjiajie2010

 
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