例1 ( 2015 年全國Ⅰ卷理綜第 39 題節(jié)選) 若要測定培養(yǎng)液中微生物 B 的菌體數(shù),可在顯微鏡下用 直接計數(shù); 若要測定其活菌數(shù)量,可選用 法進行計數(shù)。 例2 (2019 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選) Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基,若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標菌并對菌落進行計數(shù),接種時,應采用的方法是 。 (參考答案: 血細胞計數(shù)板 稀釋涂布平板法 稀釋涂布平板法)
解析:顯微鏡直接計數(shù)法是利用顯微鏡、血細胞計數(shù)板等工具對純培養(yǎng)懸浮液直接計數(shù)來檢測樣本中的細胞數(shù)目。該方法能直觀、快速地檢測出單細胞狀態(tài)下的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子的數(shù)目,但是不能區(qū)分死細胞和活細胞,不適合細胞密度低的樣品。
釋涂布平板法常常需要先將樣品進行一系列的稀釋,然后吸取適量稀釋樣品涂布在平板上,在稀釋度適宜的情況下一個菌落是由一個活細胞繁殖形成的,從而通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推算活菌數(shù)。該方法能靈敏地檢測出樣品中的活菌數(shù),但實驗過程手續(xù)繁、耗時長、影響因素較多。 顯微鏡直接計數(shù)法由于不能區(qū)分死菌和活菌,因此計數(shù)結(jié)果往往比實際活菌數(shù)偏高。為避免把死菌計數(shù)在內(nèi),可用臺盼藍染色: 被染成藍色的為死菌,反之為活菌。稀釋涂布平板法測定活菌數(shù)目的時候,由于相鄰兩個或多個細胞連在一起,可能形成一個菌落,因此測定值比實際值小。 例3.(2016 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選)若在某次調(diào)查中,某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為 36 個/平板,而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了 6 個菌落,這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了 現(xiàn)象。若將30(即36-6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法 ( 填“正確”或“不正確”) 。(參考答案: 污染 不正確) 設置不接種的空白培養(yǎng)基作為空白對照組,證明培養(yǎng)基制備過程中沒有被雜菌污染,增強實驗的說服力,保證實驗結(jié)果的準確性。若該培養(yǎng)基上出現(xiàn)了菌落則說明實驗過程出現(xiàn)污染現(xiàn)象,應舍棄數(shù)據(jù),查找原因,重做實驗。
例4.(浙江高考2016年10月)取適量含產(chǎn)脲酶細菌的10-4、10-5兩種土壤稀釋液,分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)48h,推測固體培養(yǎng)基上菌落數(shù)最少的是( ) A.10-5稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 B.10-5稀釋液+LB固體培養(yǎng)基 C.10-4稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 D.10-4稀釋液+LB固體培養(yǎng)基 解析:在相同稀釋度下,選擇培養(yǎng)基上允許能分解尿素的菌類( 還可能有土壤中的自生固氮菌) 存活,而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上允許土壤中幾乎所有菌類都能生存,因此若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)比選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)多,則說明該培養(yǎng)基有選擇作用。答案:A
例5、( 2018 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選) 甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:甲同學涂布了3 個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140 和149,取平均值133。乙同學涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169 和176,取平均值124.有人認為這兩位同學的結(jié)果中,乙同學的結(jié)果可信度低,其原因是: 。 (參考答案: 正確稀釋后涂布平板,平板上的菌落數(shù)為 30~ 300 之間,乙同學的結(jié)果中三個平板的菌落數(shù)有一個只有27)。 解析:在采用稀釋涂布平板法進行計數(shù)時,必須設置3個稀釋度并且成梯度,每個稀釋度重復3 次以上,取平均值,避免結(jié)果的偶然性,使結(jié)果更加準確可靠。 若上述乙同學的結(jié)果中三個平板的菌落數(shù)分別是30、169和176,能取三者的平均值作為實驗結(jié)果嗎?對于數(shù)據(jù)的變異程度,最重要的度量方法是標準差。參照平板菌落數(shù)的允許差值如表1。
三個平板的菌落數(shù)分別是30、169和176,平板菌落平均數(shù)125處于101~ 300之間,標準差所允許差值為±≤50,運用標準差公式計數(shù),上述例題標準差為82,已經(jīng)超出允許范圍。因此,同一稀釋度的3次重復菌落數(shù)處于30 ~ 300的范圍內(nèi)時,若數(shù)據(jù)相差較大,超過允許的差值,也應舍棄。舍棄數(shù)值30后不足三個平板,也不能用菌落數(shù)為169和176這兩個平板的平均值來推算樣品中的活菌數(shù),而應找出原因并重新實驗。