具體操作見下圖：

①將菌種管和待接種斜面試管握在左手中，試管底接觸掌心。斜面一面向上，并處于接近水平位置。

②先菌種和待接種斜面試管的棉塞旋轉(zhuǎn)一下，以便接種時易于拔出。右手以拿筆或拿毛筆的姿勢捏住接種環(huán)金屬柄，將要伸入試管部分的金屬柄和金屬絲在酒精燈火焰外焰上灼燒滅菌。

③用右手小指、無名指和手掌下沿將兩管的棉塞同時夾住并拔出，棉塞不得接觸任何物品，更不得放在桌面上。

④再將兩個試管口在火焰上灼燒。將灼燒過的接種環(huán)伸入接種管內(nèi)。使接種環(huán)在試管內(nèi)壁上冷卻，然后用接種環(huán)在菌苔上刮取少許后抽出，抽出時勿與試管壁相碰，也不要通過火焰。

⑤迅速將粘有菌種的接種環(huán)伸入待接種斜面試管內(nèi)，自斜面底部向上往復(fù)“之”字劃線，注意不要劃破瓊脂。

⑥劃線完畢后將接種環(huán)抽出，灼燒管口，塞上棉塞。塞棉塞時勿用試管口去迎棉塞，以免試管離開火焰周圍無菌環(huán)境時污染雜菌。檢查試管塞是否塞緊后將其放于試管架上。火焰灼燒接種環(huán)。

這里提到的斜面穿刺是指固體高斜面穿刺，如下圖。

固體高斜面穿刺示意圖

是把目標(biāo)菌苔通過接種針接種到固體培養(yǎng)基內(nèi)部和斜面上的一種接種方法。沙門氏穿刺接種三糖鐵斜面的操作就屬這種情況。穿刺固體培養(yǎng)基是為了觀察細(xì)菌在深層培養(yǎng)基中生長和代謝的情況。

操作時用筆直的接種針，從長有目標(biāo)菌的培養(yǎng)基上挑取少量菌苔。將接種針平穩(wěn)刺入培養(yǎng)基，勿觸到管底（距離試管底部大約2mm~3mm），也不可碰到試管內(nèi)壁，然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針，最后在斜面上進(jìn)行“之”字劃線。

這里需要特別注意的是：斜面劃線和穿刺操作一定針對純培養(yǎng)物，否則實驗操作是無意義的。劃線或穿刺的目的是為了將純培養(yǎng)物二次傳代培養(yǎng)。這種操作也見于標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)壯或傳代。整個操作過程中要嚴(yán)格規(guī)范操作，嚴(yán)格控制交叉污染。

針對細(xì)菌是否好氧，又可分為好氧菌固體培養(yǎng)基接種、厭氧菌固體培養(yǎng)基接種和微需氧菌固體培養(yǎng)接種。這可以用厭氧罐、厭氧盒或厭氧袋。搭配配套使用的厭氧劑和微需氧劑來實現(xiàn)合適的培養(yǎng)環(huán)境。對于要求特別嚴(yán)格或者菌體特別敏感的情況時，可以借助厭氧手套箱來進(jìn)行操作（如下圖）。

厭氧手套箱是20世紀(jì)50年代末問世的專門用于研究專性厭氧菌的重要裝置，箱體結(jié)構(gòu)非常嚴(yán)密，箱內(nèi)既可以通過塑料手套進(jìn)行實驗操作，又可進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。箱內(nèi)一般充入85%的氮氣、5%的二氧化碳和10%的氫氣。同時將氧氣用催化劑去除，使箱內(nèi)始終維持嚴(yán)格的無氧狀態(tài)。物品可以由有帶有密閉裝置的交換室進(jìn)出箱體。