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酶抑制分光光度法介紹

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-07-15  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示: 由農(nóng)藥殘留快速檢測儀生化檢測法開發(fā)的速測卡法(酶抑制顯色紙片法)和速測儀法(酶抑制分光光度法),前者在80年代在省級部
          由農(nóng)藥殘留快速檢測儀生化檢測法開發(fā)的速測卡法(酶抑制顯色紙片法)和速測儀法(酶抑制分光光度法),前者在80年代在省級部門小范圍使用過,后被后者取代。目前我省廣泛使用農(nóng)藥殘留檢測方法主要有兩大類—色譜檢測法和速測儀法。色譜檢測法用作農(nóng)殘定量分析,可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù),主要分布在省級相關(guān)部門,部分地州也具有一定的檢測能力。速測儀法只能作農(nóng)殘定性分析,但它具有短時間能夠檢測大量樣本、檢測成本低,對于檢測人員技術(shù)水平要求低,易于在基層推廣等特點,是目前我國控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法,也是目前國內(nèi)和我省應(yīng)用最為廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測方法。廣泛用于蔬菜、水果生產(chǎn)基地和批發(fā)市場等,主要用來防止有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留嚴重超標的蔬菜和水果流入市場。

  一、有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的作用機理

有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲神經(jīng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性,造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響正常傳導(dǎo),使昆蟲中毒致死。如果有有機磷農(nóng)藥存在,有機磷農(nóng)藥就與膽堿酯梅結(jié)合,膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿,造成乙酰膽堿在神經(jīng)肌接頭和體內(nèi)其它部位的過量積聚,引起一系列神經(jīng)中毒癥狀。

  二、乙酰膽堿酯酶抑制法(酶法)的作用原理

從生物化學(xué)的角度看,有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥與乙酰膽堿是競爭性作用于膽堿酯酶的,即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結(jié)合,催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿,另一方面,如果膽堿酯酶與有機磷農(nóng)藥結(jié)合,就阻斷了反應(yīng)的進行。根據(jù)這個原理,就可以利用膽堿酯酶的催化反應(yīng)的抑制法,設(shè)計一種通過顏色變化的直觀的檢測方法,來快速檢測有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的殘留情況。因此,生物化學(xué)法(酶法)就是利用某種酶受影響的程度來反映農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量。

  三、速測儀法(酶抑制分光光度法)方法原理

乙酰膽堿酯酶水解后,水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色,有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性,使這種酶不能被水解,從而無顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑,用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。在溶液中反應(yīng)后,用分光光度計測定吸光值隨時間的變化,計算出抑制率,以此判斷蔬菜中含有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的情況。

  四、速測儀法的優(yōu)缺點:

優(yōu)點:在于簡單方便,快捷、成本低廉。整個檢測過程只需30分鐘左右,它可以作為傳統(tǒng)儀器分析方法的有益補充,針對市場、農(nóng)場蔬菜農(nóng)藥殘留量進行快速篩選監(jiān)測,保證上市蔬菜食用的相對安全性。

缺點:酶試劑易失活,導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定,檢測結(jié)果誤差較大,重復(fù)性不好,實際應(yīng)用中的確認率大約為60%~70%左右;存在檢測盲區(qū),只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥,不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥;不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽性的農(nóng)產(chǎn)品;需要對檢測人員進行專門培訓(xùn),否則將會對出現(xiàn)的問題無法正確處理或判斷,得出錯誤的結(jié)果。


編輯:songjiajie2010

 
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