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淺談“滅菌知識(shí)和技巧”

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-06-14
核心提示: 微生物的研究已經(jīng)發(fā)展到純培養(yǎng)階段,必須要清清楚楚知道,用的是什么菌,培養(yǎng)條件是什么,代謝產(chǎn)物是什么……等等一系列問
 微生物的研究已經(jīng)發(fā)展到純培養(yǎng)階段,必須要清清楚楚知道,用的是什么菌,培養(yǎng)條件是什么,代謝產(chǎn)物是什么……等等一系列問題,所以,獲得純培養(yǎng)物是微生物研究的前提條件。

在微生物發(fā)酵中,也存在混菌發(fā)酵,但也是已知混菌,只要是研究就只允許生產(chǎn)菌種存在,不能因?yàn)榛祀s其他菌種而影響試驗(yàn)結(jié)果或無法分析試驗(yàn)結(jié)果。因此,對(duì)所需物品和材料滅菌,環(huán)境消殺非常重要。

下面一起學(xué)習(xí)一下既方便又實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室滅菌消毒方法。

一、滅菌和消毒的區(qū)別
1.概念不同
滅菌:應(yīng)用物理或化學(xué)的方法殺死或除去物品上或環(huán)境中的所有微生物。
經(jīng)過滅菌以后的物品,應(yīng)該不存在具有生命力的微生物營(yíng)養(yǎng)體及其芽孢、孢子,即處于無菌狀態(tài),否則就是滅菌不徹底。
消毒:應(yīng)用物理或化學(xué)的方法殺死物體上或環(huán)境中絕大部分微生物(特別是病原微生物)。
物品經(jīng)消毒處理后,雖仍有少數(shù)微生物未被殺死,但已不致引起有害作用,實(shí)際是不徹底的滅菌。
2.方法不同
滅菌:干熱滅菌、濕熱滅菌等。
消毒:有物理方法,化學(xué)方法、生物方法等。
3.目的不同
滅菌:殺死所有微生物,保證無菌狀態(tài)。
消毒:殺死絕大多數(shù)微生物,防止病原體傳播。

二、微生物實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法

(一)干熱滅菌法

定義:顧名思義,在干燥高溫環(huán)境(如火焰或干熱空氣)條件進(jìn)行滅菌的技術(shù),不需要加水等操作。

原理:干熱滅菌是在高溫條件下將微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。

分類:主要包括火焰滅菌法和干熱空氣滅菌法。

1.火焰滅菌法

滅菌方法:又叫灼燒法,直接用酒精燈火焰等灼燒器械或器皿的方法。

適用范圍:實(shí)驗(yàn)室接種針、鑷子等金屬器械滅菌,三角瓶、培養(yǎng)皿和試管等瓶口的滅菌。

注意事項(xiàng):使用過程中,注意冷卻時(shí)間,以免影響目標(biāo)菌種。

2. 干熱空氣滅菌法

滅菌條件:干熱空氣滅菌所需溫度更高(160-170℃),時(shí)間更長(zhǎng)(1-2h),一般160℃、滅菌2h,但干熱滅菌溫度不能超過180℃,否則包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦,甚至引起燃燒。

適用范圍:耐高溫的玻璃和金屬制品,不允許濕熱氣體穿透的油脂和耐高溫的粉末化學(xué)藥品。

優(yōu)點(diǎn):無毒、不傷害環(huán)境、對(duì)金屬和鋒利的儀器無腐蝕性。

缺點(diǎn):熱穿透速度慢、殺菌殺滅耗時(shí)、不適用于大多數(shù)材料。

注意事項(xiàng):

使用過程中,物品不能擺放太擠,需要留出一定的空間,以免影響空氣流通;

物品不能靠壁,以免燒焦或起火。

(二)濕熱滅菌法

定義:跟干熱滅菌相對(duì),它是一種利用高溫和濕潤(rùn)條件滅菌的方法,主要使用高壓蒸汽、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌。主要指高壓蒸汽滅菌法,高壓蒸汽滅菌是最常用滅菌最徹底的滅菌方法。

滅菌條件:實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法。將待滅菌物品放入高壓蒸汽滅菌鍋中,通過加壓高溫蒸汽進(jìn)行滅菌,通常在121℃下保持20-30分鐘。根據(jù)不同的物品,選擇不同的滅菌溫度和滅菌時(shí)間。

原理:利用水的熱量傳導(dǎo)性,使微生物蛋白質(zhì)凝固變性達(dá)到殺菌的效果。
適用范圍:除少部分不能高溫和濕潤(rùn)試劑,大多數(shù)物品都可以采用該方法。

優(yōu)點(diǎn):蒸汽來源容易,操作費(fèi)用低廉,無毒,滅菌徹底,不會(huì)留下任何化學(xué)殘留物,對(duì)環(huán)境無污染。

缺點(diǎn):設(shè)備費(fèi)用高,不能用于怕受潮的物料滅菌。

注意事項(xiàng):

使用之前,一定要檢查滅菌鍋的水位線,以防干燒;
物品不要放的太擁擠,以免影響蒸汽流通;
不要靠器壁,以免打濕封口膜或包裝紙;
手動(dòng)滅菌鍋或半自動(dòng)滅菌鍋,一定要注意排盡冷空氣;
壓力降至0,溫度降至80℃以下在打開鍋蓋。
三、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法
1. 過濾除菌法

原理:將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾,使大于濾膜孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留,從而達(dá)到除菌的方法。

濾膜孔徑應(yīng)在0.22~0.45μm范圍內(nèi)或用更小的細(xì)菌濾膜,溶液通過濾膜后,細(xì)菌和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻,并利用濾膜的吸附作用,阻止小于濾膜孔徑的細(xì)菌透過。

適用范圍:多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)液等。

2. 巴氏消毒法

原理:在一定溫度范圍內(nèi),溫度越低,細(xì)菌繁殖越慢;溫度越高,繁殖越快。但溫度太高,細(xì)菌就會(huì)死亡。
不同的細(xì)菌有不同的最適生長(zhǎng)溫度和耐熱、耐冷能力。巴氏消毒其實(shí)就是利用病原體不是很耐熱的特點(diǎn),用適當(dāng)?shù)臏囟群捅貢r(shí)間處理,將其全部殺滅。

適用范圍:乳制品多采用巴氏消毒法,將需要滅菌的液體加熱至68℃左右,保持15-30min,以殺死其中的病原菌。

優(yōu)點(diǎn):減少營(yíng)養(yǎng)成分流失,保留食品風(fēng)味。

缺點(diǎn):不能殺死所有細(xì)菌,滅菌不徹底。

3. 甲醛熏蒸法

原理:甲醛是一種無色易溶于水的有機(jī)化合物,具有刺激性氣味。它是一種傳統(tǒng)的滅菌劑,通過與微生物的蛋白質(zhì)、核酸等生物分子發(fā)生反應(yīng),破壞其結(jié)構(gòu)和功能,從而殺死微生物。

適用范圍:實(shí)驗(yàn)室環(huán)境消殺。

優(yōu)點(diǎn):不受環(huán)境溫度、濕度和微生物種類等影響,因此被廣泛應(yīng)用于各種場(chǎng)所的消毒。

缺點(diǎn):甲醛對(duì)眼睛、皮膚和呼吸系統(tǒng)等具有刺激作用。

注意事項(xiàng):

對(duì)人體粘膜有強(qiáng)刺激性,消毒時(shí)應(yīng)注意防護(hù);

甲醛蒸汽在遇到明火或高溫時(shí)會(huì)發(fā)生爆炸,需要避免火源。

4. 紫外線法

利用紫外線燈進(jìn)行照射滅菌的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射,可以殺滅多種微生物。

滅菌方法:使用前打開紫外燈照射,時(shí)間為30min。使用時(shí)關(guān)閉紫外燈,通風(fēng)5-10min,再進(jìn)行操作。

原理:通過對(duì)微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。

適應(yīng)范圍:適合于實(shí)驗(yàn)室空氣、地面、操作臺(tái)面滅菌。

優(yōu)點(diǎn):

紫外線消毒不會(huì)產(chǎn)生任何化學(xué)物質(zhì),因此不會(huì)帶來環(huán)境污染;

紫外線消毒速度相對(duì)快;

紫外線消毒的效果非常好,可以殺滅包括細(xì)菌、病毒、真菌等多種病原體;

紫外線消毒設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單,安裝和維護(hù)成本較低。

缺點(diǎn):

紫外線對(duì)光線的穿透力較弱,因此只能對(duì)表面的病原體進(jìn)行消毒,對(duì)于深層的病原體效果較差;

紫外線消毒存在死角,容易有消毒盲區(qū);

紫外線消毒的效果受到多種因素的影響,例如溫度、濕度、水質(zhì)等,需要嚴(yán)格控制消毒環(huán)境。

注意事項(xiàng):

操作過程中,要關(guān)閉紫外燈;

紫外線燈管壽命較短,紫外線消毒設(shè)備需要定期維護(hù),以確保消毒效果。

5.臭氧法

原理:臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能夠氧化分解細(xì)菌內(nèi)部酶類,破壞他們的細(xì)胞器和DNA、RNA,作用于外膜的脂蛋白的內(nèi)部的脂多糖,使細(xì)菌發(fā)生通透性畸變而溶解死亡。

優(yōu)點(diǎn): 
作用時(shí)間比較短;
消殺空間沒有局限性;
比紫外線照射強(qiáng)度大,效果好;
易分解,不易產(chǎn)生二次污染。
缺點(diǎn):
臭氧具有強(qiáng)氧化性,對(duì)人體細(xì)胞有一定的損傷性;
臭氧系統(tǒng)配置投資會(huì)比輻射滅菌、氯類消毒液投資大;
對(duì)橡塑等有強(qiáng)腐蝕性,使用前需要對(duì)部分儀器采取保護(hù)措施;
不能開啟太長(zhǎng)時(shí)間。
注意事項(xiàng):
開啟臭氧機(jī),人員一定要立即離開;
臭氧未散盡,不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室;
開啟臭氧機(jī)時(shí)間不易過長(zhǎng),否則會(huì)產(chǎn)生二次污染。

編輯:songjiajie2010

 
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