1.被滅菌物體含菌量

含菌量越高，需要的滅菌時間越長。因此，用天然原料配制的培養(yǎng)基所需的滅菌時間要比組合培養(yǎng)基所需的長。

天然原料簡單來說，營養(yǎng)成分既復(fù)雜又豐富、難以說出其確切化學(xué)組成的原料就是天然原料，比如說各種蛋白胨、酵母浸粉、玉米漿等。

培養(yǎng)基中含有這些成分需要較長的滅菌時間，尤其是玉米漿等。

2.滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度

滅菌鍋是靠蒸汽的溫度而不是單純靠壓力來達(dá)到滅菌效果的。混有空氣的蒸汽與純蒸汽相比，其壓力與溫度的關(guān)系很不相同，因此，使用加壓蒸汽滅菌時，必須先徹底排盡鍋內(nèi)的空氣。

(1)滅菌鍋上同時裝有壓力表和溫度計(jì)；

(2)將待測氣體引入深層冷水中，若只聽到“撲撲”聲而無氣泡冒出，則證明蒸汽中已不含空氣；

(3)滅菌鍋內(nèi)加入耐熱性的芽孢桿菌，滅菌后取出培養(yǎng)，觀察其是否能生長即可知滅菌溫度是否達(dá)到；

(4)加入適當(dāng)熔點(diǎn)的固體試劑，經(jīng)滅菌后看其是否熔化等等。

3.滅菌對象的pH

滅菌對象的pH<6.0時，微生物易死亡；pH在6.0~8.0時，微生物不易死亡。

4.滅菌對象的體積

滅菌對象的體積大小因影響熱傳導(dǎo)速率和熱容量，故會明顯影響滅菌效果。在實(shí)驗(yàn)室工作中，在對大容量培養(yǎng)基滅菌時，必須注意相應(yīng)延長滅菌時間。

這一點(diǎn)要提醒一下，很多朋友在滅培養(yǎng)基的時候往往只注意到培養(yǎng)基的成分而忽略培養(yǎng)基的體積，10mL培養(yǎng)基和5-6L滅菌時間一致，結(jié)果只有一個，要么沒滅透要么滅過了。

5.加熱與散熱速度

在加壓滅菌時，一般只注意達(dá)到預(yù)定壓力后的維持時間。事實(shí)上，由于季節(jié)的變化，或滅菌物件體積的大小，都會使“上磅”或“下磅”時間出現(xiàn)很大的差別，從而影響培養(yǎng)基成分的破壞程度，進(jìn)一步影響研究工作的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，故應(yīng)適當(dāng)控制。